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(1)原核生物具有繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等特点,因此常作为基因工程中的受体细胞.
(2)成功构建基因表达载体,才能使目的基因在受体细胞内存在和表达.
(3)基因表达载体的组成包括:目的基因、标记基因、启动子、终止子.来自cDNA文库的基因是通过逆转录得到的,无启动子和终止子等,将其插入在表达载体的启动子和终止子之间才能构成完整的基因并在受体细胞内表达.
(4)采用DNA分子杂交技术可检测干扰素基因是否成功导入大肠杆菌的DNA上.
故答案为:
(1)繁殖快多为单细胞?遗传物质相对较少
(2)基因表达载体的构建?受体细胞表达
(3)启动子?终止子
(4)DNA分子杂交
(1)①基因组文库包含某种生物所有的基因,而cDNA文库是由mRNA经逆转录形成的基因组成的,由于基因的选择性表达,cDNA文库只包含某种生物部分基因,所以cDNA文库小于基因组文库.
②B过程是逆转录过程,需要逆转录酶.根据碱基互补配对原则,A、C过程可以使用同一种探针筛选含目的基因的菌株.
③目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外,还可以分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增.PCR技术是在高温条件下进行的,该过程中所用酶要耐高温.
(2)T4DNA连接酶能连接平末端的磷酸二酯键,使目的基因与质粒连接起来.为使目的基因在酵母菌细胞中高效表达,需要把来自cDNA文库的目的基因片段正确插入表达载体的?启动子和终止子之间.
(3)将目的基因导入微生物细胞时,常用Ca+处理酵母菌,使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞,再与表达载体于缓冲液中混合,在一起的温度下完成转化.
(4)检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体上,可通过DNA分子杂交技术进行检测;检测目的基因是否转录形成mRN,可通过分子杂交技术进行检测.这两种技术都需要用带标记的目的基因做探针.检测目的基因是否成功翻译,可以用抗原-抗体杂交技术.
故答案:(1)①大于? ②逆转录酶 可以 ③DNA cDNA? 耐高温
(2)T4 磷酸二酯? 启动子 终止子
(3)感受态
(4)抗原-抗体杂交 带标记的目的基因
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